目的 探讨膜铁转运辅助蛋白(HEPH)在胰腺癌中的表达特征、预后意义及其与细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)表型的相关性。
方法 通过公开数据库分析HEPH在泛癌及胰腺癌组织中的表达差异,结合临床样本检测HEPH在胰腺癌组织中的表达水平。采用生存分析和受试者工作特征曲线(ROC)评估HEPH的预后价值。根据HEPH表达水平对样本进行分组,以基因表达倍数变化为排序指标进行基因集富集分析(GSEA),筛选其显著富集的生物学通路。构建HEPH稳定敲低的胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990,将感染pLKO.1-Puro空载体慢病毒设为scramble (阴性对照)组,感染shHEPH慢病毒设为shHEPH-1、shHEPH-2和shHEPH-3敲低组;采用RT-qPCR和Western blot验证敲低效率;通过划痕实验和Transwell实验检测HEPH对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;同时检测EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Dunnett-t检验。采用单因素Cox回归进行生存分析,计算风险比(HR)及95%置信区间,并绘制Kaplan-Meier生存曲线。
结果 HEPH在胰腺癌组织中高表达,且高表达与患者较短的总体生存期相关(HR = 1.55,P = 0.038)。ROC曲线分析显示,HEPH评估胰腺癌患者3年及5年总体生存状态的AUC分别为0.638和0.678。免疫组织化学及配对组织检测结果进一步证实,HEPH在胰腺癌组织中呈高表达。富集分析显示,HEPH高表达分组的基因富集分析在EMT通路富集(NES = 3.000,P < 0.001)。与scramble组相比,敲低HEPH后,PANC-1和SW1990细胞迁移[PANC-1:(148.70 ± 19.30)比(314.30 ± 55.97)个;SW1990:(175.00 ± 24.58)比(425.00 ± 26.51)个]和侵袭细胞数[PANC-1:(97.67 ± 15.57)比(227.70 ± 21.73)个;SW1990:(90.67 ± 11.93)比(321.30 ± 34.70)个]下降(P 均 < 0.01)。与对照组相比,HEPH敲低组细胞中E-cadherin (PANC-1:3.07 ± 0.48比1.00 ± 0.05;SW1990:2.58 ± 0.41比1.00 ± 0.02)升高(P 均 < 0.000 1),而N-cadherin (PANC-1:0.33 ± 0.06比1.01 ± 0.05;SW1990:0.44 ± 0.08比1.00 ± 0.05)和Vimentin (PANC-1:0.36 ± 0.06比1.00 ± 0.02;SW1990:0.39 ± 0.06比0.99 ± 0.02)降低(P 均 < 0.01)。
结论 HEPH在胰腺癌组织中高表达,与患者不良预后相关。敲低HEPH可抑制胰腺癌细胞迁移与侵袭能力,伴随EMT标志蛋白表达改变,提示HEPH高表达与EMT激活及细胞迁移侵袭能力增强相关,HEPH可能成为胰腺癌预后评估及潜在治疗干预的候选分子。