目的 探讨叉头盒转录因子P1 (FoxP1)介导自噬途径调控转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的内皮-间充质转化(EndMT)过程的作用机制。
方法 将人脐静脉内皮细胞分成对照、TGF-β1诱导EndMT模型组(TGF-β1)、干扰RNA阴性对照组(TGF-β1+si-NC)、FoxP1干扰RNA组(TGF-β1+si-FoxP1)、过表达空质粒阴性对照组(TGF-β1+oe-NC)、FoxP1过表达组(TGF-β1+oe-FoxP1)、FoxP1过表达联合自噬抑制剂组(TGF-β1+oe-FoxP1+3-MA)。Western blot检测内皮、间充质标志物及胶原蛋白表达;应用mCherry-EGFP-LC3双荧光系统检测自噬;通过划痕实验评估细胞迁移能力。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。
结果 Western blot结果显示,与对照比较,TGF-β1组内皮标志物VE-cadherin、CD31表达降低,间充质标志物α-SMA、Vimentin表达升高,胶原蛋白Collagen Ⅰ(3.08 ± 0.09比1.00 ± 0.08)、Collagen Ⅲ表达(3.14 ± 0.10比1.00 ± 0.05)升高,细胞迁移能力[(75.20 ± 4.30)%比(36.80 ± 2.60)%]、p62表达(2.24 ± 0.07比1.00 ± 0.07)增强,Beclin-1 (0.49 ± 0.03比1.00 ± 0.02)、LC3 Ⅱ/Ⅰ表达水平(0.17 ± 0.01比1.00 ± 0.08)降低(P均< 0.01);与TGF-β1+oe-NC组相比,TGF-β1+oe-FoxP1组VE-cadherin和CD31表达上调,α-SMA、Vimentin表达下降,胶原蛋白Collagen Ⅰ(2.08 ± 0.10比4.38 ± 0.15)、Collagen Ⅲ表达(1.86 ± 0.07比3.60 ± 0.14)、细胞迁移能力[(46.66 ± 5.15)%比(77.56 ± 7.30)%]、p62表达(1.77 ± 0.09比2.24 ± 0.08)降低,Beclin-1 (0.82 ± 0.01比0.49 ± 0.03)、LC3 Ⅱ/Ⅰ表达水平(0.55 ± 0.02比0.20 ± 0.01)升高(P均< 0.01)。与TGF-β1+oe-FoxP1组相比,TGF-β1+oe-FoxP1+3-MA组Beclin-1 (1.60 ± 0.03比1.96 ± 0.02)、LC3 Ⅱ/Ⅰ表达(2.20 ± 0.04比3.88 ± 0.16)下降,p62 (0.70 ± 0.02比0.49 ± 0.05)、Collagen Ⅰ(0.80 ± 0.02比0.51 ± 0.03)、Collagen Ⅲ表达(0.70 ± 0.01比0.29 ± 0.02)升高(P均< 0.01),E-cadherin和CD31的表达均下调,α-SMA、Vimentin表达上调,细胞迁移能力[(58.63 ± 6.19)%比(40.84 ± 5.27)%]增强(P均< 0.01)。
结论 FoxP1过表达可激活自噬途径抑制TGF-β1诱导的EndMT过程,旨在为心肌纤维化的机制研究与治疗提供新的细胞学视角。