目的 探究小鼠肾小管上皮细胞特异性c-kit基因敲除对肾单侧缺血再灌注损伤(unilateral ischemia-reperfusion injury,uIRI)后巨噬细胞浸润及肾间质纤维化的影响。
方法 选取肾小管上皮细胞c-kit基因特异性敲除(Ggt1-Cre c-kit-/-)小鼠、干细胞因子受体LoxP纯合(c-kitloxp/loxp)小鼠、野生型(wild type, WT)8周龄雄性C57BL/6J小鼠构建uIRI模型。实验小鼠分为6组:Ggt1-Cre c-kit -/- uIRI组、c-kitloxp/loxp uIRI组、C57BL/6J uIRI组(WT uIRI组)、Ggt1-Cre c-kit -/-假手术组、c-kitloxp/loxp假手术组、C57BL/6J假手术组(WT假手术组),12只/组。分别于术后1 d、3 d、14 d和28 d取材,检测血清肌酐、血尿素氮水平和肾脏组织病理学改变,天狼星红染色评估肾间质纤维化;免疫组化观察巨噬细胞浸润情况;Western印迹和RT-qPCR法检测α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、Ⅰ型胶原的蛋白及mRNA表达。组间比较采用方差分析。
结果 与WT uIRI组及c-kitloxp/loxp uIRI组相比,Ggt1-Cre c-kit -/- uIRI组小鼠在uIRI术后各时间点的血清肌酐与血尿素氮水平均较低(P均<0.05);uIRI术后3 d、14 d,Ggt1-Cre c-kit -/- uIRI组巨噬细胞浸润数量亦较其他两组减少;uIRI术后28 d,Ggt1-Cre c-kit -/- uIRI组肾间质纤维化评分以及纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA及蛋白水平均低于其他两组(P均<0.05)。
结论 肾小管上皮细胞c-kit基因敲除可显著减轻肾间质纤维化,并抑制巨噬细胞聚集,提示c-kit基因有可能成为肾脏疾病治疗的新靶点。